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转印膜公司前沿信息_转印膜工艺(2024年12月实时热点)

内容来源：威名网所属栏目：教程更新日期：2024-11-28

转印膜公司

丽春红染色常见误区及解决方法丽春红染色在蛋白质电泳中应用广泛，但许多实验者在操作过程中常常遇到条带模糊、背景干扰等问题。本文将详细解析这些常见误区，并提供有效的解决方法，帮助大家获得更清晰的实验结果。 𐟌ˆ 丽春红染色的原理丽春红是一种常用的蛋白质染色剂，其分子中含有苯环和吡啶环结构，具有强烈的亲水性和阳离子性。通过与蛋白质中的阴离子基团发生静电作用，丽春红能使蛋白质发生颜色变化，从而实现染色效果。在蛋白质电泳中，丽春红可以与蛋白质结合并形成复合物，使蛋白质在凝胶中呈现出明显的色带，便于观察和分析蛋白质的迁移情况。 𐟔 丽春红染色的意义确认蛋白转膜的成功：丽春红染色可以帮助确认蛋白质是否成功转移到膜上，以及转移的效率如何。评估蛋白的表达水平：通过观察染色后的膜片，可以初步评估目标蛋白在样品中的表达水平，作为定量分析的基础。 𐟓 丽春红染色的操作步骤转膜完成后，取出膜（可洗可不洗），将转印好的膜放入盛有丽春红染液的容器中，室温摇床孵育10分钟左右（具体根据使用的染液说明进行），直到蛋白区出现红色的条带即可。取出转印膜，用纯水冲洗膜，使背景干净，观察并拍照记录结果。观察结束后，继续用纯水冲洗，然后再用TBST洗几遍，直到差不多看不到红色的背景或丽春红完全去除，然后进行封闭、孵抗体等后续WB步骤。 ⚠️ 注意事项丽春红染色一般在封闭前进行，染出来的效果更好。在染色过程中加入辅助剂可提高染色效果。封闭之后再进行染色，封闭层会阻碍染料渗透，影响染色效果。丽春红可用于PVDF膜、硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜上的蛋白检测，但不适用于尼龙膜上的蛋白检测。丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用水或其他洗涤缓冲液洗去，不会影响后续用于检测抗原的显色反应。通过这些步骤和注意事项，相信大家能够更好地掌握丽春红染色的技巧，避免常见误区，获得更准确的实验结果。

5个技巧搞定大分子蛋白WB图！如果你在研究大分子量蛋白（超过150KD），发现Western-blot总是跑不出漂亮的图，那么这篇文章一定对你有帮助！大分子量蛋白的提取通常比较困难，因为它们通常是膜蛋白，属于非可溶性蛋白，表达量也较低。使用溶液法（如RIPA）裂解时，这些蛋白往往会丢失在不可溶组分中。因此，选择合适的方法进行蛋白提取或富集至关重要。以下是五个关键步骤，帮助你跑出漂亮的大分子蛋白WB图：选择合适的凝胶 𐟧𔊔ris-Glycine凝胶的pH为8.6，但保质期较短，且在跑胶过程中pH会上升至9.5，这会导致蛋白降解和低分辨率。 Bis-Tris凝胶的pH为6.4，稳定性和保质期都较好，但需要在溶液中添加抗氧化剂如DTT来维持蛋白的还原性。 Tris-Acetate凝胶的pH为7，跑大分子蛋白时分辨率很高。推荐使用Tris-Acetate凝胶！梯度浓度很重要 𐟓ˆ 凝胶浓度与孔径成反比：浓度越小，孔越大。较大的蛋白质更容易通过较大的孔。建议使用低百分比的凝胶，如7%。可以使用梯度凝胶，尤其适合新样本。虽然制作梯度凝胶较为棘手，需要梯度凝胶装置，但现在许多公司出售具有不同范围的预倾倒梯度凝胶，大大节省了时间。调整转移buffer 𐟔„ 转移buffer的组成至关重要。甲醇的存在会使大分子蛋白沉淀。通过减少转移buffer中的甲醇百分比（10%或更低）来避免这种情况发生。为了进一步确保蛋白质不会沉淀，可以添加SDS至终浓度为0.1%。SDS向蛋白添加均匀的负电荷，使得它们更容易从凝胶转移到膜上。选择合适的膜 𐟧ꊨ†œ一般有PVDF膜或NC膜，跑大分子蛋白选择PVDF膜。PVDF膜不需要在转移buffer中添加甲醇，目的蛋白转印的机会更高。增加转印时间 ⏳ 在正确的选择完凝胶、转印膜及转移buffer后，转印正式开始。半干转快且方便，但不适用于大分子蛋白。推荐使用湿转，因为大分子蛋白转移时间很慢，推荐350-400 mA转移90min或4Ⰳ，40 mA，转印过夜。通过以上五个步骤，你可以更好地跑出漂亮的大分子蛋白WB图！

如何高效快速地转膜（精简版） 𐟔 膜的选择选择合适的膜是Western blot成功的关键。根据你的实验方案、目标蛋白的特性以及分子大小，选择适合的膜材质、孔径和规格。常见的两种膜是硝酸纤维素膜（NC）和PVDF膜。它们的特性对比见图二。 𐟚€ 转膜方式转膜主要有两种方式：槽式湿转和半干转移。前者操作简单，转移效率高；后者适用于大胶的蛋白转移，且所用缓冲液较少。 𐟒堥ˆ˜操作 1️⃣ 将剪好的PVDF膜用无水甲醇润湿至少30秒。 2️⃣ 组装转膜三明治结构（如图所示）：黑面（负极）→海绵→3层滤纸→胶→转印膜→3层滤纸→海绵→红面（正极），每层之间不能有气泡。然后将三明治转移至电泳槽中（黑面对黑面），注意电极方向。 3️⃣ 加入转膜液：使用配置好的快速转膜液。 𐟒ᠥ🫩€Ÿ转膜液的优点高效安全：不使用甲醇，减少有毒试剂的使用。快速稳定：能在25-30分钟内完成转膜过程，产热量小，减少蛋白损失。兼容性好：兼容多种凝胶类型，如Laemmli胶、预制胶、FastPAGE、Bis-Tris胶等。 𐟓 建议事项转印电流建议设定为恒流400mA，一般25-30分钟可以将150kD以下蛋白完全转印；小于100kD蛋白20分钟即可完全转印；对于大于150kD蛋白，建议延长5-10分钟。凝胶浓度影响转印效率，对于胶浓度7.5%，20分钟即可完成转印；对于胶浓度10%，25-30分钟即可完成转印；对于胶浓度大于10%，建议延长5-10分钟。短时间转膜时不需要放冰上，否则会影响效率。转膜时，根据不同分子量蛋白选择相适应的凝胶浓度，原则是：高分子量蛋白选低浓度胶，低分子蛋白选择高浓度胶。检测多个蛋白时，建议切胶分别转膜。 𐟔 转膜效果确认方法转膜后，如果想确认转膜效果，可以继续试验，以下方法可供参考：丽春红S印迹膜染色法：带负电荷的丽春红S与带正电的氨基酸残基及蛋白的非极性区结合，形成红色条带。丽春红S与蛋白质的结合是可逆性的，红色染料很容易洗掉，不影响后续WB检测。考马斯亮蓝凝胶染色法：对转膜后的蛋白凝胶进行染色，以检测残留蛋白。推荐使用快速蛋白染色液，灵敏度高，仅1小时或更短时间即可完成染色，脱色直接用去离子水即可。预染蛋白Mark判断：实时监测，分子量做参照。

WB曝光后PVDF膜保存全攻略𐟓– 大家好！今天我们来聊聊WB实验中PVDF膜的活化、转膜和保存方法。希望这些小技巧能帮到大家，让你们的实验更加顺利！ PVDF膜的活化与转膜步骤湿转法：将膜在甲醇中浸泡30秒，直到膜从透明变为半透明。将膜放入双蒸水中浸泡2分钟。将膜放入转印缓冲液中平衡至少5分钟。半干转法：膜在甲醇中浸泡只需15秒。其他步骤同湿转法。如何确定转膜是否成功？染色法：染色法是一种常用的评估蛋白质转移情况的方法。通过染色，可以直观地观察到蛋白质在膜上的分布。染料分类：可逆染料：如丽春红，优点在于可以在评估后洗掉，不会干扰后续的免疫检测。但灵敏度通常不如不可逆染料。不可逆染料：如氨基黑和考马斯亮蓝，虽然灵敏度高，但一旦染色，会永久性地标记蛋白质，从而干扰后续分析。如何剥离PVDF膜上的抗体？立即剥离：如果可能，应在第一次使用后立即进行抗体剥离。保存膜：如果无法立即剥离，需将PVDF膜用保鲜膜包裹，并存放在含有PBS的密封袋中，然后置于4Ⰳ保存。避免膜干燥，因为这可能会影响后续的剥离效果。准备剥离溶液：使用加热和去污剂的组合来帮助从PVDF膜上剥离抗体。例如，可以使用含有脱脂剂的溶液，如0.1M甘氨酸(pH2.2）或0.1M盐酸。加热剥离：将PVDF膜浸入剥离溶液中，然后加热至约37Ⰳ至55Ⰳ，以促进抗体的解离。温和摇动：在加热过程中，轻轻摇动膜，以帮助去除抗体，通常需要几分钟到几十分钟不等。监测剥离效果：定期检查膜，以确认抗体是否已成功剥离。中和pH：剥离后，使用1㗐BS或1㗔BS缓冲液将膜中和至中性pH，以准备膜的再次使用。清洗和保存：彻底清洗膜以去除所有残留的剥离溶液，然后根据需要保存或立即进行下一步实验。 WB曝光后PVDF膜的保存方法洗涤膜：如果膜上存在未结合的检测试剂，首先使用TBST或PBST溶液进行洗涤，通常需要洗涤多次以确保清除。干燥膜：洗涤完成后，让膜在室温下自然干燥。PVDF膜干燥后结构稳定，干燥状态便于保存，且可以重新湿润以进行后续实验。保护膜：干燥后，将膜夹在保护膜或透明塑料袋中，确保膜平整无折痕或损伤。低温保存：短期保存时，将膜存放在4Ⰳ的冰箱中。4℃最多2周；-20℃最多2个月；-80℃长期保存。但需注意长期低温可能会影响某些蛋白质的抗原性。避光保存：如果膜上有荧光标记或对光敏感的物质，应在黑暗中保存，避免光照导致信号衰减。记录信息：在膜或其包装上记录重要信息，例如实验日期、膜上内容等，以方便未来的查询和使用。重新使用PVDF膜进行曝光缓慢解冻：从-80℃冰箱取出PVDF膜后，在4Ⰳ冰箱中缓慢解冻数小时，或在室温下解冻至少30分钟到1小时，以防止因温差过大而损伤膜结构。缓冲液平衡：将膜在TBST或PBST中平衡一段时间，这一步有助于去除储存过程中可能形成的结晶或沉淀。希望这些小技巧能帮助大家更好地进行WB实验！如果有任何问题或需要更多帮助，欢迎随时留言哦！𐟘Š

𐟧NC膜与PVDF膜的孔径对比 𐟤”你是否在选择NC膜和PVDF膜时感到困惑？这两种膜的孔径有所不同哦！NC膜，即硝酸纤维素转印膜，其孔径通常用于特定实验需求。而PVDF膜，如Pall品牌的BSPO161型号，具有不同的孔径规格。𐟔在选择时，务必确认货号和规格，避免混淆。例如，Pall的NC膜货号是66485，而PVDF膜货号是BSPO161。记住，孔径的选择对实验结果至关重要！𐟒ኊ𐟓Œ小贴士：在购买前，请务必核对货号和规格，确保选购到正确的产品。如有疑问，不妨在网上查找更多信息或咨询专业人士。

得力彩色白板笔套装：宝宝的绘画好伙伴 𐟎芦ˆ‘家的小宝贝才上幼儿园，但对画画的兴趣可大了。每次在家里，他都会用我给他买的水彩笔到处涂涂画画。为了不让家里的墙和地板变成他的画布，我特意给他买了这款得力彩色白板笔套装。这样既能保护家里的装修，又能满足宝宝画画的愿望，真是两全其美！ 𐟓栥𜀧𕋨这款套装里有12种颜色的白板笔，颜色鲜艳，色泽饱满，都是宝宝常用的颜色。它采用了全新的配方，笔杆转印膜部分添加了抗菌材料，减少细菌滋生，给宝宝用起来更放心。白板笔的纤维笔头设计，由塑料和纤维等高分子材料制成，耐写耐磨，长时间使用也不易变形，书写和图画时非常顺滑。不管是在白板、玻璃还是金属材质上使用，都很合适。 𐟖Œ️ 使用感受自从买了这款白板笔套装后，我还给他配了一个得力的小白板。宝宝用它来书写时也非常顺滑，材质健康，安全性不用担心。这12支笔的色泽非常鲜艳，宝宝画一笔就能呈现出精致的色彩。现在我家宝宝天天都用这支笔在白板上画画，每次画完都能擦掉，所以可以重复使用，既环保又方便。 𐟌𑠥Ÿ𙥅𛧻˜画兴趣从宝宝刚有意识的时候，我就开始逐渐培养他对绘画的兴趣。不得不说，这款白板笔套装真的非常好用。自从入手了之后，我家宝宝不仅画起来更加随意了，而且画画时也不会浪费纸，非常环保。看着宝宝拥有了一个这么棒的爱好，我真的是太开心了！这款得力彩色白板笔套装真的是个不错的选择，既能让宝宝尽情发挥创意，又能保护家里的环境。推荐给大家！ 𐟎耀

这些年买了这么多假货。第一个是20毫米的石粉树脂假绿松石，所谓关注福利，20元。第二个18毫米桶珠，直接就是染色塑胶，用刀片划一下，片状掉屑，也是关注福利，10元。第三个12毫米，看起来最像天然的，铁线纹也很逼真，在空洞里用刀尖转圈，也是片状掉屑，6.9元。第四个是16毫米假虬角，实际上是石粉珠子水转印膜技术镀的一层膜，19.8元。第五张是一对12毫米玻璃，孔洞里面也是光滑的，毫无打孔钻磨纹，孔洞外面有磕碰断茬，明显玻璃的贝壳状，一两块钱。第六张是一对20毫米天河石，明显滴胶珠痕，10元。第七张是10个仿绿松石隔片，同样是划痕看出来的，10元。第八张是40颗6毫米冰种翡翠碎珠，品质差颜色乱，20元。以后不知道还会不会上当。[滑稽]

扬州美甲培训学校推荐，快来看看吧！如果你在扬州想学美甲，不妨看看这两家评价不错的学校，都是经过精心筛选的，绝对专业靠谱！扬州FS美甲学校（学美评分：9.8）推荐课程：中式美甲学习时间：7天学费：3000-4000元课程内容：猫眼胶、拉斯胶、石膏胶、模型胶、雪花圣诞甲、全贴甲片、半贴甲片、粉类、贝壳甲、水波纹、卡通、腮红甲、琥珀甲、晕染甲、石纹晕染南京LY美甲学校（学美评分：9.8）推荐课程：国际美甲精英班学习时间：45天学费：5000-6000元课程内容：法式美甲（标准法式、平法式、反法式、心形法式、V型法式）、丝绒甲、印花技法、转印膜技术、木屑镶嵌技法、多种宝石制作、设计各种指甲镶嵌技法及注意事项、高级美甲拍摄与修图技巧、雕花技巧（内雕水晶甲、外雕水晶甲、三维立体雕花、日本3D雕花、光疗雕花设计）

𐟔Ÿ一条WB实验宝典，完美条带稳出！ 𐟧ꗂ实验，从样品制备到成像，每一步都关键！想跑出完美条带？这里给你总结了10条宝藏经验！ 1️⃣ 洗净上样孔𐟚🯼š确保电泳槽孔无杂质，避免蛋白污染，结果更一致。 2️⃣ 凝胶温度要适中𐟌᯸：过热可能导致凝胶熔解，影响分离效果。 3️⃣ 样品缓冲液离子强度要正确𐟧꯼š影响蛋白迁移，要适合你的样品哦。 4️⃣ 不要过载上样𐟒导š避免蛋白质溢出或带模糊，结果更清晰。 5️⃣ 转印三明治去气泡𐟒�š确保蛋白质均匀转移，转印更完美。 6️⃣ 转印前预平衡𐟧š凝胶和转印膜在转印缓冲液中预平衡，转移更均匀。 7️⃣ NC膜避免SDS𐟚민š影响蛋白结合和信号清晰度，要小心哦。 8️⃣ PVDF膜可用SDS✅：与NC膜不同，它可在含SDS缓冲液中使用。 9️⃣ 避免膜变干𐟒篼š转印后保持湿润，避免非特异性结合。 𐟔Ÿ 调整转印功率和时间⏰：根据蛋白质大小和膜类型优化转移效率。遵循这些经验，你的WB实验条带一定稳稳哒！𐟎‰

KEL转印膜，KEL品牌PVDF膜，KEL品牌NC膜在Western blotting实验中，NC膜和PVDF膜是最常用的两种膜。NC膜是特异性转移介质之一，使用范围十分广泛，也是最早用于Western blotting实验的膜。PVDF膜是在1985年开发出来的，它能在比较苛刻的条件下(比如在酸性或碱性条件下，或者在有机溶剂存在时)将蛋白保留，因此更广泛用于Western blotting实验中。 PVDF膜本质上是一种疏水性的聚合物，不带电荷并具有疏水性，不能被常规转膜液所浸润，为了在水性缓冲液中使用，需要在使用前进行预处理以浸润和活化膜。最常用的方法是使用50%（v/v）或更高浓度的醇（甲醇、乙醇和异丙醇）溶液进行浸润和活化，使得PVDF膜中微孔内的空气能够被低表面张力的甲醇所替代，从而易于后续缓冲液进入PVDF膜中的微孔内，使得PVDF膜从疏水性转变为亲水性，在浸润过程中膜的外观会从不透明转变为半透明，此时表明PVDF膜已被完全浸湿。然后用水反复冲洗以去除醇类，再直接将膜放入转印缓冲液中进行平衡。膜被浸湿后，通过电转移，蛋白质与膜接触发生疏水作用而被吸附在PVDF膜上。膜孔径越小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。首先，较小的孔径会限制蛋白分子的运动，减缓其转移速度，蛋白与膜的结合就更充分，从而更容易被拦截在孔道内；其次，较小的孔径还能提供较大的膜表面积，从而提高了蛋白与膜接触的机会；此外，较小的孔径也能提供更高的表面密度，从而增加了孔道与溶液间的分子间吸引力，这种吸附方式被称为“毛细作用”。Schweitzer和Kriz在一项研究中发现，较小的孔径可以增强其吸附能力并提供更高的蛋白密度，蛋白分子量越低，蛋白的比表面积越大，与膜接触面越大越充分，结合就更紧密。但是，如果膜的孔径小于0.1 ，那么蛋白的转移就很难进行下去了，是因为蛋白质分子的直径大约在1-100 nm之间。如何选择PVDF膜？一般情况下，分子量大于20kD的蛋白应选择0.45的膜，分子量小于20kD的蛋白应选择0.2的膜。0.2的PVDF膜内部表面积大约是0.45的PVDF膜的三倍，因此其吸附能力更高。总之，选择PVDF膜的孔径大小需要根据样品蛋白的特性和大小来确定，以期获得最佳的结合效果。

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